生物制藥行業(yè)的小伙伴們,如果您正在做蛋白電荷異構(gòu)體的分析,80%-90%的人手頭上都有一款ProPac WCX-10的經(jīng)典色譜柱,每次拜訪客戶,大家都說(shuō)這柱子價(jià)格貴啊!有沒有妙招來(lái)延長(zhǎng)這款柱子的壽命,降低檢測(cè)成本。 我們傾聽大家的心聲,這里給出一些小竅門和注意事項(xiàng),幫您節(jié)省時(shí)間成本和經(jīng)濟(jì)成本!
有圖有真相,首先我們先剖析一下這跟柱子填料的結(jié)構(gòu)。
經(jīng)過(guò)庖丁解牛,我們知道了這根柱子的結(jié)構(gòu),那么第二步要學(xué)會(huì)看QAR( N細(xì)胞色素C>2250, 1.0<As<1.7, P<1760)并重復(fù)COA條件做個(gè)入庫(kù)檢驗(yàn)。符合出廠標(biāo)準(zhǔn)再使用。
三是重點(diǎn)的,掏心窩的話了,仔細(xì)閱讀柱子的快速操作手冊(cè)。
第四步就是我們重點(diǎn)中的重點(diǎn)了,色譜柱的清洗方法。
1.對(duì)于輕度污染,使用1-2M高鹽溶液在分析完成后進(jìn)行清洗就可以了。
2.對(duì)于比較嚴(yán)重的污染,進(jìn)樣100-500uL或者更多進(jìn)樣體積的0.1-1M NaOH進(jìn)行清洗。(在進(jìn)行此步操作時(shí),請(qǐng)?jiān)诰彌_液A體系下進(jìn)行,完成進(jìn)樣NaOH后,進(jìn)樣緩沖液A 500ul)
3.使用NaOH過(guò)柱子清洗。
.配置20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液(使用NaOH調(diào)節(jié)pH到6.5,,并對(duì)流動(dòng)相超聲脫氣)。
.使用20 mmol/L NaOH為流動(dòng)相,以0.5 mL/min的流速在室溫下,沖洗柱子15分鐘。
.使用20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液,以 1mL/min的流速平衡柱子1小時(shí)。
4.20 mmol/L MES(pH6.5)的緩沖液高溫處理。
.以0.2 mL/min或者0.5 mL/min的流速在50度下平衡柱子48小時(shí)。
.以0.5 mL/min的流速在80度下平衡柱子8小時(shí)。
5.如果有保護(hù)柱,請(qǐng)將保護(hù)柱和分析柱分開獨(dú)立清洗。
6.如果上述清洗方法無(wú)效,且有柱壓上升的現(xiàn)象,可以將柱子反接在系統(tǒng)上清洗,但是不要超過(guò)該柱子能耐受的大壓力值。
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